Cómo contar el número de células

Experimentos microbianos a menudo requieren que sabemos cuántas bacterias, por ejemplo, están presentes. Conocer el número de células microbianas ayuda a indicar si las células están creciendo o muriendo y ayuda experimentos para ser consistentes día a día.

Los métodos para descifrar el número de células presentes fácilmente y con precisión se utilizan en laboratorios de microbiología cada día. Estos incluyen métodos directos donde las colonias se cuentan directamente y métodos indirectos, donde se hace una estimación del número de células.

Los métodos directos de células contando

Determinación del número de células bacterianas que están vivas en una muestra se realiza mediante recuentos viables. Cada método para el cálculo de los números viables de organismos se aprovecha del hecho de que cuando una suspensión de bacterias se sembraron en medios sólidos, cada uno viven célula bacteriana crecerá para formar una colonia, que es lo suficientemente grande como para ser visto.

Cuando la concentración de bacterias en una muestra es alta, se debe diluir lo suficiente para que las colonias son distintas entre sí, que se realiza con dilución en serie.

En la figura, un cultivo de bacterias se diluye varias veces mediante la adición de un volumen fijo al primer tubo (la primera dilución) y luego tomar un volumen fijo desde el primer tubo y de añadir a la segunda tubo (la segunda dilución). Esto se repite varias veces (por eso se llama serial dilución) en un esfuerzo para diluir el cultivo bacteriano inicial.

Un pequeño volumen de cada dilución se platea luego en agar y las células bacterianas individuales serán cada forma una colonia. Diluciones crecientes se traducirá en una disminución del número de bacterias presentes y, por lo tanto, un número decreciente de colonias en cada placa de agar. El número de colonias se utiliza entonces para calcular hacia atrás para determinar el número exacto de células que estaban presentes en la muestra original.

Para calcular el número de células viables en la muestra original, el número de colonias presentes después de que las placas se han incubado se multiplica por el factor de dilución. El número de células en una muestra se expresa generalmente como unidades formadoras de colonias (UFC) por unidad de volumen (en este caso ml) o CFU / mL.

Cuando los números de células en una muestra son muy bajos, tal como en agua del lago, un gran volumen de la muestra se puede pasar a través de un filtro, que luego se cultivaron con el medio adecuado para producir colonias del microbio de interés. En este caso, el número de colonias se divide por el volumen de muestra filtrada.

Por ejemplo, si 5 litros (L) de agua del lago se filtraron y 100 que aparecieron las colonias después de la incubación, a continuación, el número original de bacterias en el agua fue de 100 colonias / 5 L = 20 CFU / L.

Otra manera de contar el número de células en una muestra es por recuentos microscópicos directos. Con este método, todas las células de la muestra - ya sea vivos o muertos - se cuentan, pero te da una estimación inmediata del número de bacterias sin necesidad de incubar una muestra durante 24 horas o más.

Los métodos indirectos de células contando

Aunque no es tan precisa, los métodos indirectos son más rápidos y más conveniente que los métodos directos en la estimación del número de microbios en una muestra.

Turbidez es la cantidad de dispersión de la luz causada por las células en un cultivo líquido. Una máquina llamada espectrofotómetro pasa un haz de luz a través de un tubo transparente que contiene un cultivo bacteriano. Como el número de células en un cultivo aumenta, más luz se dispersa y menos de ella pasa a través del tubo para ser grabado en el otro lado.

La turbidez se expresa como la absorbancia y la densidad como óptica (OD). Cuanto mayor sea el número (entre 0 y 2), el más concentrado las células en la solución.

Otra manera de estimar indirectamente el número de células es medir la actividad metabólica de la muestra para un sustrato específico. De esta manera, la cantidad de residuos producidos - ya sea un gas que puede ser capturado y se mide o un metabolito que se puede utilizar con un indicador en los medios - pueden ser usados ​​para calcular el número de células en crecimiento están en la cultura.

El último método para estimar indirectamente el número de células es mediante el cálculo del peso seco del organismo en cultivo. Este método se utiliza a menudo con los hongos que forman colonias filamentosas largas que no se rompen fácilmente por dilución. La muestra se concentra y se extrae el líquido. Luego, las células se secan y se ponderan.